液相色譜儀的組成及分類(lèi)

一. 高壓輸液系統(tǒng)

     貯液裝置、高壓輸液泵、過(guò)濾器、脫氣裝置等

1. 貯液器：貯液器用于存放溶劑。溶劑必須很純，貯液器材料要耐腐蝕，對(duì)溶劑呈惰性。貯液器應(yīng)配有溶劑過(guò)濾器，以防止活動(dòng)相中的顆粒進(jìn)進(jìn)泵內(nèi)。溶劑過(guò)濾器一般用耐腐蝕的鎳合金制成，空隙大小一般為2mm。

2. 脫氣裝置：脫氣的目的是為了防止活動(dòng)相從高壓柱內(nèi)流出時(shí)，開(kāi)釋出氣泡進(jìn)進(jìn)檢測(cè)器而使噪聲劇增，甚至不能正常檢測(cè)。

3. 高壓輸液泵  高壓輸液泵是液相色譜儀的重要部件，是驅(qū)動(dòng)溶劑和樣品通過(guò)色譜柱和檢測(cè)系統(tǒng)的高壓源，其性能好壞直接影響分析結(jié)果的可靠性。

    對(duì)高壓泵的基本要求是：

    ①流量穩(wěn)定；②輸出壓力高，zui高輸出壓力為50Mpa；③流量范圍寬，可在0.01～10ml／min范圍任選。④耐酸、堿、緩沖液腐蝕。⑤壓力波動(dòng)小。

2. 梯度洗脫裝置  梯度洗脫是利用兩種或兩種以上的溶劑，按照一定時(shí)間程序連續(xù)或階段地改變配比濃度，以達(dá)到改變活動(dòng)相極性、離子強(qiáng)度或pH值，從而進(jìn)步洗脫能力，改善分離的一種有效方法。當(dāng)一個(gè)樣品混合物的容量因子是范圍很寬，用等度洗脫時(shí)間太長(zhǎng)，且后出的峰形扁平不便檢測(cè)時(shí)，用梯度洗脫可以改善峰形、并縮短分離時(shí)間。HPLC的梯度洗脫與GC的程序升溫相似，可以縮短分析時(shí)間，進(jìn)步分離效果。使所有的峰都處于*分離狀態(tài)，而且峰形尖而窄。

二. 進(jìn)樣器

    進(jìn)樣器一般要求密封性好，死體積小，重復(fù)性好，保證中心進(jìn)樣，進(jìn)樣時(shí)對(duì)色譜系統(tǒng)的壓力和流量波動(dòng)小，并便于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。

    高壓進(jìn)樣閥是目前廣泛采用的一種方式。閥的種類(lèi)很多，有六通閥、四通閥，雙路閥等。以六通進(jìn)樣閥zui為常用。

 三.分離系統(tǒng)

    色譜分離系統(tǒng)包括色譜柱、固定相和活動(dòng)相。色譜柱是其核心部分，柱應(yīng)具備耐高壓、耐腐蝕、抗氧化、密封不漏液和柱內(nèi)死體積小、柱效高、柱容量大、分析速度快、柱壽命長(zhǎng)的要求。通常采用不銹鋼管制成。

    色譜柱按內(nèi)徑不同可分為常規(guī)柱、快速柱和微量柱三類(lèi)。

    常規(guī)分析柱柱長(zhǎng)一般為10~25cm，內(nèi)徑4 ~ 5mm，固定相顆粒直徑為 5 ~ 10 mm。為了保護(hù)分析柱不受污染，一般在分析柱前加一短柱，約數(shù)厘米長(zhǎng)，稱(chēng)為保護(hù)柱。

（微量分析柱內(nèi)徑小于l mm，凝膠色譜往內(nèi)徑3～12 mm，制備往內(nèi)徑較大，可達(dá)25 mm以上。）

四. 檢測(cè)系統(tǒng)

    檢測(cè)器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測(cè)的信號(hào)，常用檢測(cè)器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學(xué)發(fā)光等。

 1. 紫外可見(jiàn)吸收檢測(cè)器（ultraviolet－visible detector，UVD）

紫外可見(jiàn)吸收檢測(cè)器（UVD）是HPLC中應(yīng)用zui廣泛的檢測(cè)器之一，幾乎所有的液相色譜儀都配有這種檢測(cè)器。其特點(diǎn)是靈敏度較高，線(xiàn)性范圍寬，噪聲低，適用于梯度洗脫，對(duì)強(qiáng)吸收物質(zhì)檢測(cè)限可達(dá)1ng，檢測(cè)后不破壞樣品，可用于制備，并能與任何檢測(cè)器串聯(lián)使用。紫外可見(jiàn)檢測(cè)器的工作原理與結(jié)構(gòu)同一般分光光度計(jì)相似，實(shí)際上就是裝有活動(dòng)地的紫外可見(jiàn)光度計(jì)。

（1）紫外吸收檢測(cè)器：

    紫外吸收檢測(cè)器常用氘燈作光源，氘燈則發(fā)射出紫外-可見(jiàn)區(qū)范圍的連續(xù)波長(zhǎng)，并安裝一個(gè)光柵型單色器，其波長(zhǎng)選擇范圍寬（190nm～800nm）。它有兩個(gè)流通池，一個(gè)作參比，一個(gè)作丈量用，光源發(fā)出的紫外光照射到流通池上，若兩流通池都通過(guò)純的均勻溶劑，則它們?cè)谧贤獠ㄩL(zhǎng)下幾乎無(wú)吸收，光電管上接受到的輻射強(qiáng)度相等，無(wú)信號(hào)輸出。當(dāng)組分進(jìn)進(jìn)丈量池時(shí)，吸收一定的紫外光，使兩光電管接受到的輻射強(qiáng)度不等，這時(shí)有信號(hào)輸出，輸出信號(hào)大小與組分濃度有關(guān)。

局限：活動(dòng)相的選擇受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶劑不能做        活動(dòng)相，每種溶劑都有截止波長(zhǎng)，當(dāng)小于該截止波長(zhǎng)的紫外光通過(guò)溶劑時(shí)，溶劑的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收檢測(cè)器的工作波長(zhǎng)不能小于溶劑的截止波長(zhǎng)

（2）光電二極管陣列檢測(cè)器（photodiode array detector，  PDAD）：

    也稱(chēng)快速掃描紫外可見(jiàn)分光檢測(cè)器，是一種新型的光吸收式檢測(cè)器。它采用光電二極管陣列作為檢測(cè)元件，構(gòu)成多通道并行工作，同時(shí)檢測(cè)由光柵分光，再進(jìn)射到陣列式接收器上的全部波長(zhǎng)的光信號(hào)，然后對(duì)二極管陣列快速掃描采集數(shù)據(jù)，得到吸收值(A)是保存時(shí)間(tR)和波長(zhǎng)(l)函數(shù)的三維色譜光譜圖。由此可及時(shí)觀(guān)察與每一組分的色譜圖相應(yīng)的光譜數(shù)據(jù)，從而迅速?zèng)Q定具有*選擇性和靈敏度的波長(zhǎng)。

下圖是單光束二極管陣列檢測(cè)器的光路圖。光源發(fā)出的光先通過(guò)檢測(cè)池，透射光由全息光柵色散成多色光，射到陣列元件上，使所有波長(zhǎng)的光在接收器上同時(shí)被檢測(cè)。陣列式接收器上的光信號(hào)用電子學(xué)的方法快速掃描提取出來(lái)，每幅圖象僅需要10ms，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)色譜流出峰的速度，因此可隨峰掃描。