依利特液相色譜柱系統(tǒng)由儲液器、泵、進(jìn)樣器、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相,被流動相載入液相色譜柱內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對運(yùn)動時,經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。

　　依利特液相色譜柱常見使用問題解析：

　　1、對于一根常用的C18柱，拿到一根新柱的時候應(yīng)該怎樣進(jìn)行活化及維護(hù)？為什么要這樣做？

　　答：新柱活化，實(shí)際上是一個平衡的過程，除了用流動相平衡外，有時候還必須用所測樣品對新柱進(jìn)行平衡，特別是測定分子量比較高的多肽，尤其重要。因?yàn)榉肿恿扛叩奈镔|(zhì)分子，擴(kuò)散速度慢，平衡所需時間也相應(yīng)較長。具體平衡方式也很簡單，多進(jìn)幾次樣品，直到峰面積和保留時間穩(wěn)定，再進(jìn)行正式進(jìn)樣測定。

　　如果要加快平衡時間，把前面用來平衡的進(jìn)樣樣品濃度加大，或者不等洗脫完成，連續(xù)進(jìn)樣多針。用待測物對新柱平衡，目的是將硅膠基質(zhì)填料表面具有非特異性吸附的位點(diǎn)的吸附能力飽和掉。

　　2、測定多肽，一般采用什么柱子？流動相是乙腈和水，還有微量的TFA。特別是像類似三肽的短肽，應(yīng)該怎么選擇柱子？

　　答：分子量不高的多肽一般選用常規(guī)C18柱就能測定，也有用離子交換柱、水性C18柱和Hilic親水作用柱的。

　　3、氨基柱在進(jìn)酸性樣品時，很傷柱子，如使用一段時間后，柱效降低，峰形改變，如何恢復(fù)？

　　答：氨基柱測酸性樣品，應(yīng)該是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能會使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化，導(dǎo)致使用一段時間后對于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。建議：用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動相洗去多余氨)，之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1％。

　　以上就是依利特液相色譜柱常見問題解析，供大家參考！